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猪转铁蛋白(TF)elisa检测试剂盒操作流程
  • 发布日期:2019-09-20      浏览次数:53
    •                 猪转铁蛋白(TF)elisa检测试剂盒操作流程

      树林间积着半尺深的枯叶,风一吹,旋转着飞扬起来,又均匀地铺散下去,掩盖了那一条倾斜着盘旋到山顶的小径。接下来介绍  猪转铁蛋白(TF)elisa检测试剂盒操作流程

      样品收集、处理及保存方法:

      1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,10×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

      2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

      3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗:途酆衔。

      4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

      5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能

      不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

       

      操作步骤:

      实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在37℃溶解;试剂或样品配制时,均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

      1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50?l,待测样品孔中先加样品稀释液40?l,然后再加待测样品10?l(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

      3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

      4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      5、加酶:每孔加入酶标试剂50?l,空白孔除外。

      6、显色:每孔先加入显色剂A50?l,再加入显色剂B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.

      7、终止:每孔加终止液50ml,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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