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内毒素ELISA检测试剂盒试验步骤
  • 发布日期:2019-02-25      浏览次数:27
    •    内毒素ELISA检测试剂盒检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法,这个方法用于检测特异性IgG,IgA盒IgM。这个方法的步是因相捕获的抗体是否是特异抗原的抗体。间接elisa在家侧IgG时比较简单,但不适用于检测其他种类的抗体。

      内毒素ELISA检测试剂盒



        内毒素ELISA检测试剂盒试验步骤:
        1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
        2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
        3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
        4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
        5、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
        6、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
        7、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
        8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
       
        内毒素ELISA检测试剂盒试验注意事项:
        1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
        2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
        3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间一般控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
        4.请每次测定的同时做标准曲线,一般做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
        5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
        6.底物请避光保存。
        7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
        8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
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